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药用植物益母草中益母草碱的提取工艺研究(二)

药用植物益母草中益母草碱的提取工艺研究(二) 药用植物益母草中益母草碱的提取工艺研究
3.1.1 沉淀反应:原理是利用益母草碱中硫酸根离子与钡离子形成不溶于硝酸白色沉淀。方法是在益母草碱中加水溶解后,加氯化钡液,生成白色沉淀,加入硝酸后,沉淀不溶解。 
3.1.2 显色反应:原理是利用益母草碱中含有酚羟基与三氯化铁反应显色。方法是样品加水溶解,加入三氯化铁振摇,溶液显茶褐色。 
3.2 紫外分光光度法(UV):鉴于益母草碱结构中的共轭结构,在200nm-400nm的紫外区有两个吸收峰,一般在217nm和277nm有最大吸收峰,但217nm易受甲醇吸收干扰,277nm没有影响,所以选择277nm作为检测波长。UV快速和精确,不需要贵重仪器,是实验室简单测定益母草碱的方法。 
3.3 高效液相色谱法(HPLC):高效液相色谱法高效、高灵敏度、分析和载液速度快、样品不被破坏等,是现代研究益母草碱测定常用方法。巩长芹等[9]发现用酸性流动相测定益母草碱单体时只出现单一的峰。Zhu Q等[10]对益母草碱混悬液经口服后,用高效液相色谱-质谱联用技术,检测大鼠血浆中样品的含量,这种方法简便且灵敏度高,为益母草碱混悬液口服后的药物代谢动力学研究提供帮助。 4 药理作用 
4.1 对子宫作用:益母草碱对子宫有兴奋作用,明显增加收缩力和作用时间。文献报道益母草碱能显著抑制药物流产后大鼠子宫的出血量和出血时间[11]。静脉注射益母草半分钟后,出现子宫兴奋,证明其剂量与强度成正相关。 
4.2 对血液系统作用:实验表明益母草碱能抗血小板聚集,降低动脉粥样硬化进程。刘新华等[12]报道益母草碱用于炎性血管疾病研究,通过抑制NF-κB信号通路和ROS产生发挥抗炎作用。另有报道益母草碱能改善微循环和红细胞的变形能力,降低血液黏度来治疗血淤症。 
4.3 对心肌作用:实验表明益母草碱是从抗氧化、抗细胞凋亡和调节线粒体功等方面对心肌保护具有一定作用。另外其还能强化缺血预处理,对大鼠心肌再灌注的保护作用[13]。
4.4 对脑部作用:益母草碱对神经毒素6-羟基多巴损伤的神经细胞有保护和改善作用,益母草碱对大脑也有保护作用。Loh[14]发表在《Stroke》上的研究表明经益母草碱预处理一周的脑缺血大鼠,在神经行为学症状中能减少中风引起梗死面积,而且增强脑组织抗氧化,提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,降低自由基损伤保护缺血性损伤。实验发现脑缺血能引起线粒体功能下降,但是益母草碱能保护线粒体功能。 4.5对前列腺作用:刘绍龑等[15]结果益母草碱能显著降低前列腺小鼠前列腺湿重和前列腺指数,减轻前列腺病理变化以及睾丸、附睾病理变化,同时益母草碱有保钾利尿作用。 5 毒性研究 
5.1 急性毒性:益母草碱能兴奋呼吸中枢,之后麻醉中枢神经;具有箭毒样作用,肌肉松弛;有麦角碱样作用,收缩子宫、扩张小动脉、血压下降;前益母草素可使纤维蛋白原和血黏度降低[16]。黄伟等[17]比较益母草不同炮制品95%乙醇热回流提取物对小鼠急性毒性大小,发现鲜益母草急性毒性最大,酒炙益母草毒性最低,并通过酒炙益母草MTD得出益母草主要毒性成分是益母草总碱。 
5.2 亚急性毒性:谢敏妍等[18]报道益母草总生物碱对肝功能和肾功能无明显毒副作用,但大剂量服用益母草总碱对肝功能有潜在影响。罗毅等[19]也报道益母草总生物碱对小鼠肝和肾的亚急性毒性,大剂量能影响小鼠肝功能,对肾功能影响不明显,提示小鼠肝脏比肾脏对益母草生物碱更敏感。 
5.3 靶器官毒性:近些年来临床报道益母草能引起药物性肾损害,经罗毅等研究报道益母草对动物的肾脏产生毒性,机制可能是脂质过氧化的损伤。文章没有发现益母草碱对肾损害的临床报道和研究报告。
6 结语 
益母草碱具有显著改善微循环和抗血小板聚集、抗炎镇痛、兴奋子宫、保钾利尿和保护心肌等功效。益母草碱是益母草中一种单体活性有效成分。由于仅存在于益母草中,全草中的含量较少,且提取分离工作量大、纯度也不高,因此多采用全合成的方法得到益母草碱。有关益母草碱的研究取得了一定成果,对其开发成新型药物有着广阔的应用前景。

参考文献 
[1] Liu X H, Pan L L, Gong Q H, et al. Antiapoptotic effect of novel compound from Herba  leonuri-leonurine(SCM-198): a mechanism through inhibition of mitochondria dysfunction in  H9c2 cells[J]. Curr Pharm Biotechnol, 2010, 11(8): 895. 
[2] 王宜梅.益母草的临床应用[J].光明中医,2006,21(2):11. 
[3] 苗明三,张玉林,史晶晶,等.复方益母草口服液对大鼠痛经模型的影响[J].中药药理与临 床,2008,24(5) : 56. [4] 孙亚楠,张祥,刘子荣,等.益母草碱口服油包油微乳在大鼠体内的药动学研究[J].中国药房,2015,26(1):30-33. [5] 张琳,蔡晓菡,高慧媛,等.益母草化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报,2009,26(1):15-26. 
[6] 李雪丽,李静雅,刘晓丹,等.SP825树脂分离纯化益母草总黄酮和总生物碱的研究[J].中央民族大学学报,2012,21:28-31. [7] 朱仁发,倪受东,王效山.益母草碱的新合成工艺研究[J].安徽大学学报,2005,29(4):84-86. [8] 周本宏,马郁文,罗毅.超声提取益母草总碱的工艺优选[J].医学导报,2006,25(5):451-452. 
[9] 巩长芹,周礼琳,王永平,等.益母草中益母草碱的HPLC检测[J].广东药学院学报,2007,23(3):247-248. 
[10] Zhu Q, Cai W M, Sha X Y, et al. Quantification of leonurine,a novel potential cardiovascular agent, in rat plasma by liquid chromatography-tandem masss pectrometry and its application to pharmacokinetic study in rats[J]. Biomed Chromatogr, 2012, 26(4): 518-523.

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