葛根及其制剂中黄酮类化合物的HPLC测定方法概述(一)

一、葛根的来源，功效，作用的介绍

（一）葛根的来源

（二）葛根的功效

（三）葛根的作用

二、葛根其所含的黄酮类成分其作用

（一）异黄酮

（二）其他黄酮类化合物

（三）药理作用研究

（四）临床应用

三、介绍常见的含有葛根的制剂

1.葛根素纳米制剂

2.葛根素常用缓释制剂

四、说明如何用HPLC法测定含葛根制剂中的黄酮化合物

1.HPLC法对黄芪葛根汤中的异黄酮类有效成分含量测定

2. HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量

五、总结

一、葛根的来源，功效，作用的介绍

（一）葛根的来源

根据^论文显示，葛属植物在世界范围内大约有18种，我国葛属植物分布尤为广泛，约有9种以及2个变种。药用葛根种类众多，包括粉葛、野葛、柴葛、葛博士一号等，产于我国的主要有粉葛和野葛。粉葛，又名“甘葛”，由于其含葛粉量大（含粉率在25%～30%）、口味甘甜而得名。同时它拥有肥大的葛根，可以于山沟中自我生长也可人工培育，目前人工栽培占绝大部分，主要产于两广地区。野葛的优点为：数量庞大、分布范围广、葛根素和黄酮含量高。此外，“湘葛一号”是我国研究者研究出的一种葛根杂交品种，也具有良好的药理作用，值得在临床大力推广。

（二）葛根的功效

1.治疗心绞痛、冠心病。通过注射普乐林葛根素注射液在有效治疗心绞痛和冠心病的同时避免产生增快患者心率和心肌耗氧量、血管外周阻力的情况。 

2.治疗眼底病。 

3.治疗早期突发性耳聋。经试验，为患者口服葛根3次左右，每次20mg，同时配合服用复合维生素B，2周内70%的患者听力有了不同程度的提高。 

4.治疗高血压。 

5.治疗头痛项僵。 

6.其他。除上述几种情况外，葛根还广泛应用于包括丰胸、治疗便秘与失眠、益智、升阳止泻、腹泻、清热解毒、消渴等方面。若与其他药物配合使用，还可治疗视网膜炎、小儿厌食症、慢性结肠炎、胃炎等病症。

（三）葛根的作用

葛根药用价值较大,具有多种药理作用,并且具有毒性低、安全范围广、药源丰富的优点。葛根素、葛根甙元在体内分布广且快,消除也快,不易积累,无代谢饱和现象,为临床安全合理用药提供了重要依据。国内外已将葛根开发成葛根口服液、葛根面包、葛根面条、葛根粉丝、葛根冰淇淋、葛根饮料、葛冰、葛冰罐头、葛根混合精、葛粉红肠等系列保健食品。作为一种尚未完全开发利用的天然野生植物资源,随着其药理、药化、临床应用、有效成分提取、检测等方面研究的不断深入,其药理功能、保健作用和应用价值将会日益引起人们的重视。值得强调的是,葛根对严重威胁人类生命健康的心脑血管疾病具有重要的药理和治疗作用,在心脑血管系统疾病高发的今天,葛根将会更加引人注目。加强对葛根的研究,开发各种药用制剂和保健食品必将具有重要的社会意义和经济价值。

二、葛根其所含的黄酮类成分其作用

（一）异黄酮

本类包括:大豆苷元(又名大豆素、大豆黄素、黄豆苷元)、大豆苷(又名黄豆苷)、葛根素(又名葛根黄素)、大豆素4′,7′-二葡糖糖苷、金雀异黄素8-c芹糖基-葡糖糖苷、金雀异黄素、大豆黄素8-c芹糖基-葡糖糖苷、金雀异黄素苷、拟雌内酯、异甘草素、芒柄黄花素、PG-1、PG-3、葛根黄素木糖苷、葛根素7-木糖苷、4′,6-二乙酰基葛根素、尿囊素、6-牡牛儿基、7,12-二羟基香豆素、7-甲基、4-羟基异黄酮、紫檀烷等。

（二）其他黄酮类化合物

1.三萜类化合物

以葛根皂醇A、B、C命名的七种皂苷是:皂草精醇、槐二醇、Cantoniensistro、大豆苷醇A、KundzapogenolB、Kundzsa-pogenolC。其皂苷元为齐墩果烷,其C2羟基上有鼠李糖基、半乳糖基、葡糖醛酸基的糖链,在C21或C22羟基上有葡萄糖基的双糖链,C28位是甲基,在E环上有氧基。

2. 三萜类成分

Arao等从葛根中得到十二个新的三萜类皂苷: Soyasaponin  A3(22)、Kudzusaponins A1(23)、Kudzusaponins  SA2 (24)、KudzusaponinsSA7 (25等，实验表明该类成分具有保肝作用。而在1985年，Kinj等已从葛根醇提液过柱后的皂苷部分分离到七个三萜类皂精醇化合物:Sophradiol (34) ,  Cantoniensistriol (35) ,Soyasapogenol  A(3fi)、Soyasapogenol  B(37)、KudzusapogenolA (38)、Kudzusapogenol  C(39)及Kudzusapogenol  B  methylester (40)。

3芳香类成分

Nohara等对葛根进一步分离得到两个芳香类化合物:but-2-enolides，以前分离、鉴定为葛根昔A (41), B (42)(Pueroside A、B)的结构应更正为but-2-enolides。Hirakura等分离到一新的芳香类化合物Kuzubutenolide A (43)。

4.其它成分

葛根苷类包括:葛根苷A、葛根苷B、葛根苷C这些被认为是二氢查耳酮的衍生物。生物碱及其他包括氯化胆碱、二氯化乙酰胆碱、长塞因、鞣质、乙酰胆碱、胡萝卜苷等。

 （三）药理作用研究

1.解酒效果好。葛根能通过清除氧自由基和抗脂质过氧化而使酒精导致的血清黏度异常变化恢复到正常状态。葛根异黄酮类化合物可显著抑制氧化损伤引起的红细胞溶血、微粒体活性氧类(-OH·,O-2)造成的过氧化反应的发生发展,并提高体内SOD活性强度。葛根中的葛根素、大豆甙元及大豆甙均可抑制嗜酒大鼠的酒精消耗,大豆甙与酒精溶液同时胃内给药,乙醇血浓度(bloodalcoholconcentration,BAC)峰值降低且延后,并可以缩短由酒精摄入诱发的睡眠时间。进一步实验表明大豆甙对BAC的抑制作用主要是通过延缓胃排空达到的。给药期间大鼠的饮食和体重不受影响。通过实验观察，葛根能够有效化解酒精导致的肝部脂质过氧化损害，在解酒方面有着极大的发展潜质。 

2.保护动物组织。葛根中所含有的异黄酮类成分可以抑制红细胞溶血，提高SOD的活性，并通过抗氧化自由基的作用恢复人体正常的血清粘度。 

3.保护心血管系统。（1）葛根总黄酮能够起到明显的扩张冠状血管的作用，且葛根素和葛根总黄酮的剂量越大，其扩张冠状血管的作用越大。此外，上述成分能够对抗由垂体后叶素引起的急性心肌缺血。在动物实验中，给正常的狗注射总黄酮后，乳酸和丙酮酸的含量与冠状窦血氧的含量均升高，且两者的含量比例不变，由此证明，总黄酮不会影响葡萄糖代谢；给正常的狗注射葛根黄酮后，缺血部位乳酸含量减少而氧含量升高，这证明葛根能够改善正常代谢。（2）治疗心律不齐。由于葛根黄酮、黄豆甙元等成分可以影响细胞膜对钠、钾、钙等的离子的通透性，因此可以对抗由急性心肌缺血、氯化钡、氯化钙引起的心律不齐。

（四）临床应用

1.中医临床应用

中医运用葛根治疗以下病证:脾虚泄泻、消渴、骨痹、中暑、胸痹、心悸、头晕、耳鸣耳聋、缺乳等。

2.现代临床应用

（1）冠心病、心绞痛

陈浩应用葛根素治疗冠心病46例，以常规治疗组(巯甲丙脯酸、β受体阻滞剂、消心痛、黄杨宁和阿司匹林等)39例为对照，观察所有患者心电图，监测血压、心率，并记录药物的不良反应。结果治疗前ST段下移两组间无显著性差异;治疗后两组对ST段下移、T波低平/倒置等异常心电图却有恢复作用，且葛根素组优于常规治疗组(P<0.05)。韦联星等对114例I一IV级冠心病心绞痛患者应用葛根素400 mg加5%葡萄糖注射液静脉滴注，1次/d，14d为一疗程，对照组给予5% C6H6O6或生理盐水静脉滴注。结果治疗组与对照组有效率分别为78. 9% ，59. 8%，显效率分别为50. 9%，35. 9%，组间差异明显;对各级心绞痛疗效比较发现，I，II级心绞痛有效率、显效率治疗组明显高于对照组，但对于III,IV级疗效差。汪晓虹等应用葛根素治疗冠心病40例，用复方丹参作对照，着重观察患者血液流变性、动态心电图、常规12导联心电图。结果各项指标较治疗前有明显改善，葛根素优于复方丹参，表明其能有效降低冠心病患者血液流变性，扩张血管，改善心肌缺血。鲍晓梅应用葛根素注射液治疗不稳定型心绞痛50例，常规口服硝酸酝类药物及阿司匹林，以部分患者服钙离子拮抗剂等对照。结果治疗组缓解心绞痛有效率为88%，改善异常心电图有效率为84%，心肌耗氧量显著下降，血液流变学指标明显改善，与对照组相比，P均<0. 05。葛根素是一种安全有效的抗心肌缺血药物。。

（2）高血压及高黏滞血症

50例患者应用葛根素治疗后,平均动脉压由治疗前的16.89±2.13kPa降为治疗后的14.90±2.13kPa,治疗结束时有效率为76%;26例冠心病患者用葛根素治疗后,发现全血比黏度、还原黏度、血栓长度、血栓干重、血小板黏附率均明显降低,表明葛根素可改善冠心病患者的高黏血症。

（3）糖尿病

郭妍等应用葛根素治疗糖尿病肾病并观察W型胶原水平的变化，采用测定血清IV型胶原与病理、糖基化血红蛋白、年龄、体质量指数相关性，并观察用葛根素前后的尿白蛋白、IV型胶原及血液流变学变化。结果糖尿病患者IV型胶原水平明显升高(P<0.05)用葛根素治疗后尿白蛋白降低，表明葛根素对早期糖尿病肾病有治疗作用。任平等将30例糖尿病视网膜病变患者随机分为葛根素治疗组(15例)和弥可保对照组15例)，各组常规降血糖药物治疗不变，3周为一疗程，观察用药前后血液流变学各项指标及视网膜中央动、静脉血流参数。结果治疗组治疗后红细胞聚集指数、全血比粘度、纤维蛋白原、血浆比粘度及血沉均有明显改善(P<0.05或P<0.01);视网膜中央动脉的收缩峰值血流速度(PSV)、舒张末期血流最大速度(EDT)、加速度(A)、视网膜中央静脉回流速度(CRE)均有改善(P<0.05);裸眼视力均有不同程度提高。说明葛根素对糖尿病视网膜病变有肯定的治疗作用。

三、介绍常见的含有葛根的制剂