黄连制剂中生物碱类化合物的HPLC测定(一)

目录

一、黄连简介及所含的生物碱类成分 1

（一）生物学特征 1

（二）黄连的功效及其有效成分 1

二、HPLC测定方法 1

（一）简介 1

（二）在生物碱类化合物测定中的应用 1

三、含黄连制剂中生物碱类化合物的HPLC测定实例 1

（一）增效黄连素胶囊中小檗碱的HPLC测定 1

1、制剂简介 1

2、实验方法 2

3、结果 2

4、结论 2

（二）黄连总碱胶囊中巴马汀的HPLC测定 3

1、制剂简介 3

2、实验方法 3

3、结果 3

4、结论 3

（三）黄连上清片中药根碱的HPLC测定 4

1、制剂简介 4

2、实验方法 4

3、结果 4

4、结论 4

四、结论 5

五、参考文献 5

正文

一、黄连简介及所含的生物碱类成分

（一）生物学特征

黄连（Coptis chinensis Franch.）属毛茛科黄连属多年生草本植物，叶基徨，坚纸质，卵状三角形，三全裂，中央裂片卵状菱形，羽状深裂，边缘有锐锯齿，侧生裂片不等2深裂；叶柄长5-12cm。生长于海拔高海拔的山谷凉湿密林中[1]。

（二）黄连的功效及其有效成分

采收后以根部入药，有清热燥湿，泻火解毒之功效。用于治疗湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，高热神昏，心火亢盛，血热，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓等。科学研究表明黄连的有效成分主要有小檗碱(berberine)、巴马汀(palmatine)、黄连碱(coptisine)、表小檗碱(epiberberine)和药根碱(jatrorrhizine)等小檗碱型生物碱[2]。

二、HPLC测定方法

（一）简介

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。

（二）在生物碱类化合物测定中的应用 

近年来，高效液相色谱法由于具有较高效的分离效能，较宽的适用范围及条件优化的灵活性等优点，在生物碱分析中得到了广泛的应用。Kabulov[3]曾对20世纪90年代前的生物碱HPLC分析法进行过较全面的综述。R.Gatti等[4]采用HPLC荧光检测器分别测定了金鸡纳碱及其二水合物的含量并发现加入维生素可以增强感光性，显著改善荧光检测器的检测范围。Ding等[5]以1-奈甲酰氯为衍生化试剂，利用柱前衍生化高效液相色谱法测定了川贝母、浙贝母和湖北贝母三种贝母粗提物中5种生物碱活性单体的含量，该方法简便易行，重现性好。此外刘芳等[6]通过数字化高效液相发研究黄连生物碱的含量，其RSD均小于5%，证明该方法简便、有效、可行。

三、含黄连制剂中生物碱类化合物的HPLC测定实例

（一）增效黄连素胶囊中小檗碱的HPLC测定

1、制剂简介

选用的增效黄连素胶囊由贵州缔谊药业有限公司出品。系采用中国贵州生长的天然中药材提取之有效成分，配以抗菌增效剂而制成。其主要成分盐酸小檗碱是毛莨科植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎的主要成分，据祖国医学记载其具有清热、解毒、止泻的作用。

2、实验方法

许波等[7]运用高效液相色谱法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱的含量。

色谱柱为中仪日立维修部Kromasil-100C18(5μm，250mm×4.6mm)，流动相为0.1%十二烷基硫酸钠的甲醇-0.2mol·L-1酒石酸(80∶20)，增流速为1.2mL·min-1，检测波长为240nm，柱温为35℃，进样量为10μL。盐酸小檗碱在以上色谱条件下的保留时间分别为9.91，6.44，3.74min，柱效以盐酸小檗碱计算为6791。

3、结果

以对照品进样量(μg)为X轴，吸收峰面积值为Y轴计算回归方程、相关系数和线性范围。得到以下方程：

Y=41.944X－0.055，r=0.999，线性范围为10.654～64.023μg;

精密度实验的结果表明，平均峰面积分别为191764，RSD依为1.21%。仪器精密度好，重现性良好，符合实验要求。供试品溶液在48h内基本稳定。低浓度药小檗碱平均加样回收率分别为98.21%(RSD为1.21%)。中浓度药的平均加样回收率分别为97.49% (RSD为2.42%)。高浓度回收率分别为98.64%(RSD为2.35%)。均符合实验要求。

4、结论

增效黄连素胶囊中小檗碱含量每粒为41.23mg。

取盐酸小檗碱溶解并稀释成适当的浓度，进样，在270～230nm波长范围内，间隔2nm，用UV-3000型二极管阵列检测器同时检测，根据各检测波长的峰形和响应值，选择检测波长为240nm。

本文建立的增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱含量的HPLC测定法，方法简便并且具有良好的准确性和重现性，完成一次分析只需15min，大大节省了分析时间。

（二）黄连总碱胶囊中巴马汀的HPLC测定