红景天胶囊中红景天苷含量的测定(二)

红景天胶囊中红景天苷含量的测定(二) 红景天胶囊中红景天苷含量的测定

一、原理

高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）是指流动相为液体的技术。早期的液相色谱（经典液相色谱）是将小体积的试液注入色谱柱上部，然后用洗脱液（流动相）洗脱。这种经典色谱法，流动相依靠自身的重力穿过色谱柱，柱效差(固定相颗粒不能太小)，分离时间很长。

70年代初期发展起来的高效液相色谱法，克服了经典液相色谱法柱效低，分离时间很长的缺点。成为一种高效、快速的分离技术。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

红景天苷胶囊粉碎后，用甲醇超声萃取，离心分离，过滤后上柱。由于各组分与色谱柱固定相（十八烷基集合硅胶）不断的进行物理作用（溶解-析出，吸附-解析等反复分配），有的组分在柱子中滞留的时间长，有的组分在柱子中滞留的时间短。滞留时间短的先流出色谱柱，滞留时间长的后流出色谱柱。从而使各组分分离开来。根据保留时间不同对组分进行定性，根据比尔定律对组分定量。

二、实验

1 仪器与试剂

1.1、实验仪器

LC-10T二元高压梯度系统+紫外检测器（赛智科技（杭州）有限公司），柱恒温箱（天津奥特赛恩斯）、survey色谱工作站（赛智科技（杭州）有限公司）,万分之一天平（赛多利斯），离心机（转速16000/min、上海卢湘仪),手动进样阀（美国罗丹妮）、超声波（功率300W，天津奥特赛恩斯），真空抽滤设备及实验室常用玻璃仪器。

1.2、所需试剂

红景天苷标准品（含量99%，中国食品药品检验所），红景天苷胶囊（市场抽检样品），色谱甲醇（美国天地），色谱乙腈（美国天地）。哇哈哈纯净水或者重蒸馏水。。

2 样品的制备

2.1供试品的制备

供试品溶液的制备取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎分析，混匀。准确移取0.5克试样（精确至0.001g）于50ml容量瓶中，加入甲醇，超声提取10min。用甲醇定容至刻度，混匀后3000rpm/min离心3min。经0.45um滤膜过滤后上机。

2.2标准品的制备

对照品溶液的制备准确称量红景天苷标准品0.02g，用甲醇溶解并定容至10ml作为标准工作液；标准工作液用流动相分别稀释至0.01,0.1，0.5,1,10,50ug/ml；

3 检测与数据

3.1色谱条件：

甲醇：乙腈：水=5:10:85为流动相，波长：275nm，色谱柱：C18(亲水型核壳柱，上海月旭公司） 4.6*250mm 5um。柱温：40℃。

3.2系统适应性实验：

分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，红景天苷的理论塔板数均在10000以上，样品谱图中红景天苷的分离度大于1.5.样品峰的保留时间和标准品峰的保留时间在允许的误差范围之内。