羌黄颈康丸是漯河市第一人民医院制剂室配制的特色制剂，由羌活、姜黄、秦艽、当归、柴胡、赤芍、防风、桂枝、黄芪、葛根、黄芩等 11 味中药制成，具有祛痹止痛、益气活血的功效，临床上主要用于治疗风寒湿痹、气血不足所致的颈椎病。
1、仪器与试剂
TU-1901型双光束紫外可见分光光度计；TFUltiMate 3000高效液相色谱仪（配有UV检测器和chromeleon色谱工作站），分析天平；超声波清洗器。葛根素对照品（批号：190752，由中国药品生物制品检定所提供，含量测定用）。羌黄颈康丸由漯河市第一人民医院提供（批号：20190402、20190404、20190406）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2、方法
①色谱条件
色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶 Waters C18（4.6mm×150mm,5μm）；柱温：35℃，流动相：甲醇∶水（21∶79）；流速：1.0ml/min，检测波长：250nm，理论板数按葛根素峰计算应不少于 2000。
②对照品溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，加 50%乙醇制成 1ml 含 15μg 的溶液，即得。精密吸取 5μl，进样，测定。
③供试品溶液的制备
取本品约 2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%乙醇 50ml，密塞，称定重量，放置 1h，超声处理（250W，50MHz）30min，放冷，再称定重量，用 50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取 5μl，进样，测定。
④线性关系考察
精密称取葛根素对照品 5.06mg，置 50ml 量瓶中，加 50%乙醇溶解并定容至刻度，即得（每 1ml 含葛根素101μg）。精密吸出上述溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于 10ml 量瓶中，加 50%乙醇至刻度，摇匀。分别精密吸取 5μl，按上述色谱条件进样，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，葛根素进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：Y=6.49×107X-4.84×106，r=0.9996 （n=6），结果表明葛根素在0.0505～0.303μg 范围内与峰面积线性关系良好。
⑤稳定性试验
取批号 20190402 羌黄颈康丸，制备供试品溶液，在室温下放置 0、1、2、4、8、12h 后分别进样，测定峰面积，结果峰面积平均值为 625967，RSD 为 1.6%，表明待测组分浓度在12h 内无明显变化，化学性质稳定。
⑥精密度试验
取批号 20140402 羌黄颈康丸，制备供试品溶液，按照上述色谱条件，分别精密吸取 5μl，连续进样 6 次，测定峰面积。结果峰面积平均值为 628541，RSD 为 0.5%（n=6）,结果表明仪器精密度良好。
⑦重复性试验
取同一批号（批号：20190402）羌黄颈康丸，依法平行制备 5 份供试品溶液并测定其含量，结果求得羌黄颈康丸中葛根素平均含量为 0.757mg/g，RSD 为 0.9%（n=5）。
3、样品含量测定
分别取3个批次的样品，依法制备并测定其葛根素的含量，结果见表 1。
【表1】
样品批号 葛根素含量（mg/g） 平均含量（mg/g）
20190402 0.757
0.753
20190404 0.753
20190406 0.749
4、讨论
（1）检测波长的选择
取葛根素对照品适量，加 50%乙醇制成1ml 含 30μg 的溶液，在 200～400nm 波长范围内进行紫外扫描，结果在 250nm 处有最大吸收，故选择 250nm 作为检测波长。
（2）流动相的选择
参照清眩治瘫丸（《中国药典》2010 年版一部）含量测定方法及有关文献，本实验采用甲醇∶水（21∶79）为流动相，在色谱图中，葛根素色谱峰与相邻组分峰分离度良好，峰形符合要求，背景无干扰，操作简单可行。
四、参考文献：
[1]张贵君，罗容，王奕洁．中药药效组分理论与中药组分学［J］．中药材，2007，30（2）：125．
[2] 王立群．中医临床常用药对手册［M］．北京：学苑出版社，2001：5．
[3]赵进喜．李成卫．糖尿病名家传世灵验药对［M］．北京：中国医药科技出版社，2010．
[4] 夏华玲. 葛根素的药理作用研究进展 [J]. 时珍国医国药，2006，17（3）：434-435.
[5]刘宏，王兰英，任建国.高效液相法测定脑栓康复浓缩丸葛根中葛根素的含量[J].北方药学，2013，10（1）：6-7.
[6]阮毅铭.HPLC 法测定葛根配方颗粒中葛根素的含量[J].黑龙江医药，2008，21（5）：19-21. [7]国家药典委员会.中国药典[S].第 1 部，北京：化学工业出版社，2010.
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