山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (11)(三)

    当物质所处于温度高于临界温度，压力大于临界压力时，该物质处于超临界状态，形成超临界流体，在此状态下，流体的溶解能力比气体大数百倍，因此可利用超临界流体对物质进行提取。CO2临界温度接近室温而且性质稳定，污染较小，空气中含量丰富，价格便宜易制备，因而被广泛作为超临界利益使用，特别适合对于温度比较敏感的组分的提取。该法的优点是自动化程度高，装好样品之后，调节好参数即可开始提取，所有产物不需要过滤，可直接进行检测。作为一项新型技术，SFE在国外发展迅速，有的产品已经实现工业化走向了市场，近几年超临界萃取技术在国内也开始受到极大的关注并开始了广泛的研究。在诸多优点同时，SFE也有着自己的缺点，比如常用的CO2是一种非极性溶剂，对于某些物质会有较强的结合能力，在提取强极性、大分子量的物质成分时提取率会有降低。此时可以考虑添加适当的夹带剂以增强其溶解力和选择性，使极性较强、分子量较大的物质被萃取出来。

山楂中黄酮的测定方法

1.芦丁标准曲线的建立

（1）配制标准溶液

精密称取干燥至恒重的芦丁样品10mg，置50ml容量瓶中，加无水乙醇30ml，轻摇使之充分溶解，定容，摇匀，得0.2mg／ml芦丁标准液。

⑵绘制标准曲线

根据中国药典委员会规定的紫外分光光度法，以芦丁为标准品进行测量。精密吸取标准溶液0、1、2、3、4、5和6m1分别置入5个25ml容量瓶中，加水至6ml，加5％NaN02溶液1ml后摇匀，静置6min；加10％A1(N03)3溶液1ml，摇匀，静置6min：加入4％NaOH溶液10ml，摇匀后加水至刻度，摇匀，放置15min，立即在510nm波长处测定吸光度(A)值，以吸光度为横坐标，浓度(C，m／v)为纵坐标绘制曲线，计算标准曲线的回归方程。

2.标准曲线回归方程

经试验测定得芦丁标准曲线见图1-1，其回归方程为：

C=0.0397A-0.0022，R2=0.9963

式中，C-芦丁浓度(mg／m1)；A-在波长510nm处测定的芦丁吸光度值。

3.提取率的计算

山楂黄酮的提取率计算公式为：

Y(％)=[(0.040A-0.002)×V/V1]×V2／m×100％

式中，A为吸光值；V为测量时定容体积；Vl为检测时所取提取液体积；V2为提取后定容体积；m为山楂果样品质量。

1.2.2微波辅助提取法

1.单因素试验

本试验研究微波提取法提取山楂中总黄酮时的影响因素，将料液比、乙醇浓度(体积分数)、提取时间、微波功率作为主要的考查因素，进行单因素试验和正交试验，从而确定微波提取法提取山楂中总黄酮的最佳提取条件[5]。

(1)料液比

准确称取5份预处理过的山楂粉末，每份1g(精确到0.0001)，置于250ml锥形瓶中，分别加入50％的乙醇溶液10ml、20ml、30ml、40ml、50ml，即料液比分别为1：10、l：20、1：30、1：40、1：50，摇匀后静置30min。设置微波功率320W，提取时间1．5min。将提取液过滤后，定容至100ml，按照1.2.1中的方法测定吸光度，并根据标准曲线的回归方程计算出总黄酮的提取率。

(2)乙醇浓度

准确称取5份预处理过的山楂粉末，每份lg(精确到0.0001)，置于250ml锥形瓶中，分别加入体积分数为40％、50％、60％、70％、80％的乙醇溶液20ml，摇匀后静置30min。设置微波功率为320W，提取时间为1.5min。将提取液过滤后，定容至100ml，按照1.2.1中的方法测定吸光度，并根据标准曲线的回归方程计算出总黄酮的提取率。

(3)微波时间

准确称取5份预处理过的山楂粉末，每份1g(精确到0.0001)，置于250ml锥形瓶中，分别加入50％的乙醇20ml，摇匀后静置30min。设置微波功率为320W，提取时间分别为1min、1.5min、2min、2.5min、3min。

将提取液过滤后，定容至100ml，按照1.2.1中的方法测定吸光度，并根据标准曲线的回归方程计算出总黄酮的提取率。

(4)微波功率

准确称取5份预处理过的山楂粉末，每份1g(精确到0.0001)，置于250ml锥形瓶中，分别加入50％的乙醇20ml，摇匀后静置30min。分别在微波功率160W、320W、480W、640W、800W条件下提取1.5min。将提取液过滤后，定容至100ml，按照1.2.1中的方法测定吸光度，并根据标准曲线的回归方程计算出总黄酮的提取率。

2.正交试验

在单因素试验的基础上，对考查的四个因素：料液比、乙醇浓度、提取时间和微波功率，分别选取3个水平作为正交试验的试验水平，建立L9(34)正交表，采用SPSSstatistics16数据分析软件，对试验数据进行分析。

1.2.3快速溶剂萃取法

本试验采用加压溶剂萃取方法，进行山楂中总黄酮的提取，建立了一种山楂中总黄酮提取的新工艺。快速溶剂萃取技术的操作要点为：精确称取10g山楂粉与等量硅藻土混合均匀，装入100ml萃取池中，再取适量硅藻土填充萃取池空隙，密封萃取池，将萃取池和收集瓶放入萃取仪，打开氮气阀门，调节分压为0.8MPa，打开萃取仪电源，仪器自检，自检完成后用清洗溶剂清洗萃取仪管道，设定预热温度开始预热；调节参数开始萃取，萃取完成后，取收集瓶中提取液，并根据1.2.1中的方法测定黄酮提取率。

1.不同溶剂对于快速溶剂提取法提取率的影响

本试验首先采用不同的溶剂对山楂总黄酮的提取效果进行研究，所采用的溶剂分别为水，乙醇，甲醇，乙酸乙酯和50％的乙醇水溶液。

2.单因素试验