山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (10)(三)

山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (10)(三) 山楂中黄酮类化合物的测定方法概述

表3   回收率实验数据

序号 样品含量(μg) 加入量(μg)) 测得量(μg) 回收率(％) RSD(％) 平均值(％) RSD(％)

绿原酸 10.3 8.2 10.5 101.6 3.1 102.2 2.0

10.3 10.2 10.5 101.6 2.2

10.3 12.2 10.6 102.9 1.9

原花青素B2 25.9 21.2 21.5 101.4 2.4 102.5 1.9

25.9 25.6 26.4 103.18 2.1

25.9 30.7 31.6 104.6 1.1

  表儿茶素 32.7 25.9 33.3 101.8 2.0 101.3 1.3

32.7 32.4 33.0 100.9 1.1

32.7 38.8 33.1 101.2 1.1

金丝桃苷 5.8 4.6 5.8 99.4 2.6 98.5 2.4

5.8 5.7 5.6 97.1 2.7

5.8 6.9 5.7 98.9 2.0

异槲皮苷 3.9 3.1 3.9 100.9 1.5 99.1 3.4

3.9 3.9 3.7 95.7 1.6

3.9 4.6 3.9 100.9 3.9

         ⑦样品含量测定:

分别取10个不同产地山楂，干果粉碎后按2.2.1项制备供试品。由于鲜果不易捣碎，样品均匀性较差，因此实验中增大了鲜果的称样量，即称取1.0 g样品于50 mL容量瓶内，70%甲醇定容，超声提取1小时。按2.1.2项下液相色谱方法测定。结果见表4。

表4    样品含量测定结果

绿原酸（mg·g-1） 原花青素B2（mg·g-1） 表儿茶素（mg·g-1） 金丝桃苷（mg·g-1） 异槲皮苷（mg·g-1）

1云南（干） 0.676 5.732 6.040 0.400 0.235

2湖南（干） 0.404 0.962 0.909 0.291 0.213

3山东1（干） 0.788 5.135 5.691 0.583 0.304

4山东2（干） 0.515 2.749 3.533 0.226 0.140

5浙江杭州（干） 0.417 3.819 3.921 0.393 0.246

6山西大同（鲜） 0.106 1.657 1.598 0.031 0.018

7山东1（鲜） 0.158 1.376 1.179 0.054 0.028

8山东2（鲜） 0.103 0.921 0.700 0.054 0.029

9江苏（鲜） 0.164 1.185 1.106 0.027 0.017

10山东（山楂炭） × ×  × × 　 ×

注   ×表示未检测到

   （四）讨论

       1.上述实验的概述:

通过LC-MS鉴定山楂中黄酮类成分，并采用HPLC建立多种黄酮类成分的同时定量方法。方法  采用LC-TOF-MS，在正、负离子模式下分别采集数据，以精确分子量结合对照品定性鉴定黄酮类成分。采用反相液相色谱法建立了绿原酸、原花青素B2、表儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷5种黄酮类成分的定量方法，并用于10种不同来源山楂样品的测定

       2.实验结果分析:

通过TOF-MS鉴定出8种可能的黄酮类成分。对其中5种黄酮成分的定量方法学进行验证，绿原酸、原花青素B2、表儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷的线性分别为1.8-178.5, 2.2-284.8, 2.7-270.6，1.5-150.0, 1.5-150.0μg·mL-1，相关系数均高于0.999；精密度、重复性的RSD均小于5.0%；平均回收率为98.5% ~102.5%，RSD小于3.5%。

实例二：

1、 对照法  ① 对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。 ② 样品溶液制备  精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。 ③ 标准曲线的制备  精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。各取10ml置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。在510nm的波长下测定吸光度。 2）  ①样品溶液的制备：  分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml容量瓶中。从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。 ②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。  ③标准曲线的制定：  精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。  ④含量测定结果：  分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。  计算公式为:样品总黄酮含量(%)=0.03692(A+0.1644)/W。  注:上式为通过回归方程转化而来，式中A为测得样品液的吸光度值，W为称样量。

首页 上一页 1 2 3 4 下一页 尾页 3/4/4

山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (10)(三)由免费论文网（www.jaoyuw.com）会员上传。