葛根及其制剂中黄酮类化合物的HPLC测定方法概述(二)

1.1 仪器：高效液相色谱仪，电子分析天平，超声仪

1.2 药品：葛根素对照品，乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯

2  方法和结果

2.1 标准曲线的绘制

精密称取样品1.0g置于25ml锥形瓶中，分别加入30%的乙醇密塞，称重，超声处理（功率250W，频率40KHZ）30分钟，放冷，量取15ml，置于中性氧化铝柱中，用30%的乙醇洗脱，收集洗脱液，置于50ml量瓶中，洗脱至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液1、2、5、10、25ul于容量瓶中，加入30%乙醇稀释至刻度，再分别注入高效液相色谱仪（色谱柱：5um，4.5mm×250mm，流动相为乙腈—甲醇—水（10：8：82）；检测波长250nm）各10ul，以峰为面积为坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=0.0123X+0.0141，r=0.9999，线性范围4.008-200ug/m[4]。

2.2  对检测实验做精密度实验，重复性实验和稳定性实验，并得出数据结论。测得峰面积RSD为0.3%，葛根素的含量为1.99mg/g，RSD=0.3%。稳定性实验结果在24小时内RSD=0.6%

2.8 样品含量测定

    取三批样品，按照上述方法制备成供试品，每批测定三次得出结果

（三）HPLC法测定糖消片中葛根素的含量

1.1 仪器：高效液相色谱仪，紫外检测仪，超声仪

1.2 药品：葛根素对照品，生地黄，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，蒸馏水

2  方法和结果

2.1 标准曲线的绘制

    精密吸取葛根素对照品溶液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、4.0ml，分别置于25ml容量瓶中，加入适量的30%乙醇超声震荡，使其溶解，加入30%乙醇稀释至刻度，色谱柱：5um，4.6mm×150mm，流动相：甲醇—水—冰醋酸（25：75:0.02）；流速：1ml/min,检测波长250nm，柱温40℃各进样20ul,以峰为面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=57817.9X-136.48，r=0.9997，线性范围0.0091-0.1630ug[5]。

2.2 对检测实验做精密度实验，重复性实验和稳定性实验，并得出数据结论。 峰面积RSD为1.13%，RSD=1.59%， 稳定性实验结果在8小时内RSD=1.80%。

四、总结

本次以高效液相色谱为基础，建立测定芪葛降糖胶囊中葛根素含量、测定糖消片中葛根素的含量、葛根汤颗粒的主要成分葛根素含量的方法，并分别对精密度，稳定性和重复性做出实验，结果表明该方法有效控制葛根汤颗粒的质量。含量测定中采用高效液相色谱法测定，方法简单准确，重复性好，可作为制剂定量的质控手段

五、参考文献

[1]国家药典委员会，葛根[S],中国药典2005年版一部，北京，化学工业出版社，2005；233-234

[2] 林少华，郝玉芳等，高效液相色谱法测定降脂减肥药颗粒中葛根素含量，时珍国医国药[J]，2006,17（2），205

[3]翟斌，张婷婷，HPLC法测定是芪葛糖胶囊中葛根素含量，黑龙江中医药[J]，2002年03期

[4]龚湛文，石任兵，刘斌；HPLC测定葛根芩连汤有效部位中黄芩苷和葛根素的含量[J]北京中医药大学学报 2003年03期

[5]周翎，许丹，HPLC法测定糖消片中葛根素的含量；辽宁中医杂志[J]，2007年34卷第3期