含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述 (6)(二)

1、膜荚黄芪含黄酮、皂甙类成分。黄酮类成分如芒柄花黄素、3'-羟基芒柄花黄素（毛蕊异黄酮）及其葡萄糖甙、2'，3'-二羟基-7，4'-二甲氧基异黄酮、7，2'-二羟基-3'，4'-二甲氧基异黄烷及其葡萄糖甙、7，3'-二羟基-4'，5'-二甲氧基异黄烷、3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷及其葡萄糖甙等。其中有些成分具较强的抗氧化活性。皂甙类成分有黄芪皂甙Ⅰ～Ⅷ及大豆皂甙Ⅰ；黄芪甲甙（即黄芪皂甙Ⅳ）与黄芪乙甙。

2、蒙古黄芪含黄芪多糖。黄芪多糖作为一类生物大分子成分，其结构与活性研究较为广泛。目前认为黄芪多糖的单糖种类主要包括L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、L-木糖、D-核糖、L-核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和D-甘露糖等。

3、黄芪甲苷为黄芪中的十多种皂苷的主要成分,为黄芪制剂质量检验的指标成分,结构为三萜皂苷。黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂质量的重要指标,而且许多中成药也以黄芪甲苷作为该品种的指示成分。但黄芪甲苷在黄芪中含量很低,提取分离比较困难。现代科学实验中黄芪甲苷可改善 心肺功能加强心脏收缩力，保护心肌，抗心力衰竭。还具有保护肝脏、抗炎、镇痛等。

（四）黄芪的制剂生产工艺简介

黄芩制剂的工艺有很多种，下面例举黄芪生脉注射制剂的生产工艺，由下列主要原料的水和／或醇提取物作活性成分和药学上可接受的附加剂组成：黄芪、党参、麦冬、五味子，其中各组分的重量份比为：黄芪１０－４０重量份、党参４．５－２７重量份、麦冬３－１８重量份、五味子１．５－９重量份。上述注射制剂的制备工艺，由各组分单独或混合以水和／或醇单次或多次提取，合并提取液，过滤、浓缩、加入注射用水后进行纯化，混合或混合提取水液进行超滤后按常规方式制成注射剂或冻干粉针剂。

二、用HPLC测定黄芪制剂中皂苷类化合物

（一）选取样品

对其中黄芪皂苷（即黄芪甲苷）的含量进行测定,在《中国药典》中黄芪甲苷被作为黄芪质量检测的标志物。

（二）HPLC法测定含黄芪制剂中皂苷类化合物的实例

外吸收的皂苷类化合物灵敏度高，结果可靠，可作为药材及其制剂品质评价的依据。黄芪甲苷常作为指标性成分用于黄芪的质量监控。 

1、黄芪及黄芪注射液中黄芪甲苷含量的测定

实验方法与结果

①、样品溶液的制备：黄芪药材粉碎为粗粉，精密称取约 2g，以甲醇80ml索氏提取完全，减压回收至干，残渣以约10ml水溶解，置分液漏斗中，以水饱和的正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇萃取液，以正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水层，萃取液水浴蒸干，以甲醇定容为5ml,过微孔滤膜，作为样品溶液。注射液样品溶液制备：精密吸取注射液10ml，余按样品制备项下“置分液漏斗”操作②、HPLC法对本品的黄芪及黄芪注射液中3种皂苷的含量进行测定，结果证明，在上述色谱条件下皂苷Ⅳ，Ⅲ，Ⅰ能达到良好分离，③、结果可靠，重现性好，尤其皂苷Ⅳ（即黄芪甲苷），适用于黄芪制剂的质量评价标准。④、赵灵芝等研究发布。

2、不同地区及来源的黄芪中黄芪甲苷含量的测定

实验方法与结果

①、材料为人工栽培样本为2年生的来自内蒙古兴和、达茂旗、赤峰（蒙古黄芪）、兴安盟（膜荚黄芪）的黄芪干燥根以及来自甘肃的黄芪干根切片（成品）；野生黄芪为采自内蒙古武川县的多年生黄芪。色谱级甲醇、色谱级乙腈、水饱和正丁醇、氨水溶液、去离子纯水、无水乙醇。仪器及耗材。TL2010高通量组织研磨仪、旋转蒸发仪（RV10）、岛津高效液相色谱仪（LC20A型，紫外检测器）、电子天平、水浴锅、超声波清洗器、索式提取器、玻璃层析柱、圆底烧瓶、分液漏斗、0.45 μm虑器等。②、黄芪甲苷的制备：研磨后精密称取4 g黄芪粉末于索式提取器中，按药典[1]的方法提取，用5 ml色谱级甲醇定容，最后用0.45 μm滤器过滤于棕色样品瓶中，4 ℃保存备用。对照品溶液制备色谱条件与系统适用性测定法样品含量测定用上述建立的方法，对不同地区及来源的黄芪样品进行甲苷含量测定，进一步比较其含量差异。③、HPLC-UV法测定黄芪甲苷含量相对稳定，方法简便，为今后黄芪干根中黄芪甲苷含量的测定提供了方法参考。④姜丽丽等研究发布。

3、黄芪饮片中的黄芪甲苷含量的测定

实验方法与结果

①、对照品溶液提取方法：精密称取黄芪甲苷对照品5mg于10mL容量瓶中，加入甲醇定容至标线，摇匀即可。②、样品中黄芪甲苷的制备：取黄芪饮片适量，大于50 干燥至恒重，用研钵研磨成粉，过380 m (40目)筛。取4 g粉末，置于索氏提取器中，加入40 mL甲醇，冷浸过夜。隔天加甲醇适量，加热回流4 h，将提取液回收浓缩至干。残渣加水10 mL，微热使其溶解，分别用40mL水饱和的正丁醇振摇提取4次后合并正丁醇液。分别用40 mL 1％NaOH溶液(替代药典方法中的氨试液)充分洗涤2次，弃去1％NaOH溶液，将正丁醇液蒸干。加水5 mL溶解残渣，放冷，注入D101型大孔吸附树脂柱(12 cm×1．5 cm)，以50mL水洗脱，弃去，然后用30 mL 40％ 乙醇洗脱，弃去，再用80 mL 70％ 乙醇洗脱，弃去。蒸干后残渣加甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，用甲醇定容至标线，摇匀，用0．45 m滤膜滤过，即得。③、采用蒸发光散射高效液相色谱法测定黄芪饮片中黄芪甲苷的含量，具有良好的准确性，可用于黄芪及其制剂中黄芪甲苷的含量分析。④、苟其宁等研究发布。

（三）在选取样品中用HPLC测定的结果

结论 采用HPLC法对黄芪甲苷含量测定,分离度好,重现性好,不需要进行前处理直接进样,回收率高。但检测灵敏度和精确度不如光二极管陈列法。因此这是一种良好的测定方法,宜广泛采用。

三、参考文献 

1.胡迎庆,牛住琴.复方黄芪口服液制备工艺研究.西北药学杂志,1999;14(4)∶162

2．鲁静,王宝琴.黄芪甲甙的薄层扫描法测定.中成药,1992;14(6)∶3

3．吴永平,徐永梅.HPLC-ELSD法测定黄芪提取物中黄芪甲苷的含量.中成药,2001;23(9)∶673

4．钱广生,刘三康,李章万.HPLC测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量,华西药学杂志.2002,17(1):41

5．赵灵芝，朱丹妮，严永清 .HPLC法测定黄芪中黄芪甲甙的含量［K］4药物分析杂志，2006，96（7）：