黄连及其制剂中生物碱类化合物的HPLC测定方法概述(二)

张纯刚等【7】探索黄连五种主要生物碱的最优提取纯化方法及含量测定方法,为制剂研究奠定基础，采用HPLC进行生物碱的含量测定，以黄连五种主要生物碱加和得率为指标，优选黄连五种主要生物碱提取及纯化工艺。盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的浓度分别在0.48～4.80、3.52～35.2、2.04～20.4、1.72～17.2、10.2～102μg/mL(r均大于0.999)范围内，与峰面积呈良好的线性关系。结果:黄连提取最优的条件为黄连饮片,加8倍量1.5％的硫酸溶液，煎煮3次，每次40 min，纯化最佳工艺为黄连提取液用Ca(OH)2调节pH 5～6，滤液加HCl调节pH 1～2，加5％NaCl，冰箱冷藏静置过夜，沉淀物干燥。结论:采用HPLC法测定黄连五种主要生物碱提取纯化工艺及含量简单可靠。

何洪林【8】利用反相高效液相色谱法测定黄连中3种生物碱的含量，鉴定其质量标准。方法：用反相高效液相色谱法测定川黄连中小檗碱、巴马亭以及药根碱的含量，色谱柱选择C18色谱柱，以乙腈-水为流动相，在345nm下检测小檗碱、巴马亭以及药根碱标准品的峰面积和出峰时间，计算川黄连中3种生物碱的含量。结果：小檗碱、巴马亭以及药根碱的峰面积分别为536.35931、143.11522以及88.73728。计算出川黄连中的3种生物碱的含量分别为5.38％、1.38％以及1.06％。小檗碱、巴马亭以及药根碱加回收率试验显示3种生物碱的回收率分别为103.8％、103.8％以及117.4％。川黄连的精密度检验为RSD是0.8％,精密度较高。结论：反相高效液相色谱法测定黄连中生物碱的含量灵敏度高，精密度高，可以为黄连的质量监测和药效评估提供有利依据。

3、HPLC法测定黄连药材及其炮制品中主要生物碱的含量研究

阳勇等【9】采用HPLC法测定黄连药材及其炮制品中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量，制定2015年版《中国药典》中黄连及其炮制品的质量标准。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.25mol/L乙酸铵和8mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液(氨水调节pH9.3)(36:64)为洗脱剂，流速1mL/min，检测波长270nm，柱温35℃。结果：盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的线性范围依次为0.006 96～0.233、0.004 75～0.152、0.003 30～0.528、0.006 31～1.010、0.004 71～0.753、0.017 8～2.884μg/mL；加样回收率依次为99.65%、98.59%、98.49%、98.66%、98.64%、98.63%，RSD依次为0.03%、0.15%、0.21%、0.12%、0.28%、0.23%。结论:该方法简便、准确、可靠，可作为2015年版《中国药典》(一部)黄连质量标准中的含量测定方法。

（二）含黄连制剂中生物碱类化合物的HPLC测定分析研究

1、HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱含量

陈娟【10】采用高效液相荧光色谱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量，使用色谱柱 Waters C18(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-0.033mol/ L磷酸二氢钾(50:50)，荧光检测器激发波长为355nm，发射波长为533nm。结果：盐酸小檗碱浓度在2.418～241.8μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r为0.9996；盐酸小檗碱加样回收率的平均值为99.5%，RSD=2.4%。结果表明采用高效液相荧光色谱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量方法简便、准确可靠,可以用于测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量。

2、HPLC法测定黄连上清片中4种成分的含量

毛爱丽【11】为了提高黄连上清片质量标准,建立同时测定绿原酸、栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱4种成分含量的方法，采用高效液相色谱法，色谱柱为DiamonsilTM C18(250 mm×4.6mm,5μm)，流动相为二元梯度系统，其中溶剂A为乙腈，溶剂B为0.3％磷酸水溶液，流速为1.0ml/min，检测波长为238nm，柱温30℃，进样量为10μl。结果:绿原酸、栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的线性范围分别为8.11～81.10μg/ml(r=0.9997)、13.08～130.80μg/ml(r=0.9997)、10.76～107.60μg/ml(r=0.9998)、7.92 ～79.20μg/ml(r =0.9998)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.19％(RSD=0.9％)、98.44％ (RSD=1.1％)、99.12％(RSD=1.0％)、99.18％(RSD=1.1％)(n=9)。结论:该方法简便、准确、重复性好，可用于黄连上清片的质量控制。

3.HPLC法同时测定连参通淋片中5种黄连生物碱类成分的含量

周亚楠等【12】建立同时测定连参通淋片中表小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的方法，采用超高效液相色谱法，色谱柱为Thermo Scientific Syncronis C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(加三乙胺调pH至3.0)(30:70,V/V)，流速为0.3 mL/min，检测波长为345nm，柱温为25℃，进样量为2μL。结果：表小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱检测进样量线性范围分别为4.08～163ng(r=0.9999)、5.72～229ng(r=0.9998)、5.67～227ng(r=0.9999)、6.78～271ng(r=0.9996)、13.2～526ng(r=0.9999)；精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%；加样回收率分别为96.83%～103.92%(RSD=2.2%,n=9)、97.62%～104.85%(RSD=2.9%,n=9)、99.44%～104.18%(RSD=1.8%,n=9)、98.64%～104.42%(RSD=1.8%,n=9)、98.24%～102.40%(RSD=1.5%,n=9)。结论:该方法简便、灵敏、快速、准确,适用于连参通淋片中5种黄连生物碱类成分含量的同时测定。

四、总结

   综上所述，黄连药材（饮片）、黄连提取物、含黄连的中药制剂等中生物碱类化合物的含量测定以HPLC法使用最为常见，且其优点较多：方法简单、快速、准确、重复性好。因此HPLC法非常适用于黄连及其制剂中生物碱含量的测定，常用于黄连及其制剂的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部)[M].中国医药科技出版社.2015:303.

[2]孙洁，严广华.黄连化学成分及有效成分药理活性的研究进展[J].中国继续医学教育.2018, 10(8):140-143.

[3]任海勇等.生物碱类成分含量测定分析方法研究进展[J].中国药物警戒.2012,(10):622-624.

    [4]王进,佟智.薄层色谱法测定香连丸中盐酸小檗碱含量研究[J].亚太传统医药,2013,9(1):28-29. 

[5]黄玉芝等.高效毛细管电泳法测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量[J].中国药业,2011,20(19):20-21.

[6]江斌等.HPLC测定黄连提取物中生物碱含量[J]. 食品与药品.2013,15(6):407-409.  

    [7]张纯刚等.黄连五种主要生物碱的提取纯化及含量测定[J].中国现代中药.2018,20(9):1146-1149,1156.

[8]何洪林.反相高效液相色谱法的运用对黄连中三种生物碱的含量测定[J].海南医学院学报.2013,19(11):1500-1502.

[9]阳勇等.HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量[J].世界科学技术-中医药现代化.2015,17(3):596-602.

    [10]陈娟.高效液相荧光色谱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱含量[J].海峡药学.2015,27(11):53-55.

    [11]毛爱丽.HPLC法测定黄连上清片中4种成分的含量[J].中国药师.2016, 19(1):196-197,201.

    [12]周亚楠等.UPLC法同时测定连参通淋片中5种黄连生物碱类成分的含量[J].中国药房.2017, 28(33):4725-4727.